La Unidad de Microscopía y citometría del IBMCC:

La unidad que se encuentra integrada en la plataforma de servicios de apoyo a la investigación del IBMCC, es necesaria para el manejo de nuevos sistemas avanzados de microscopía que han situado al IBMCC como una referencia en microscopía de la zona noroeste de España.

El empleo de la microscopía de fluorescencia y las técnicas citómicas son esenciales para abordar o profundizar en el conocimiento más íntimo de los mecanismos moleculares que subyacen a procesos tan dispares como son la inestabilidad genómica en la progresión tumoral, el apareamiento cromosómico, la fertilidad, la apoptosis neuronal, la reparación del DNA, la progresión del ciclo celular o la dinámica de la replicación, entre otros.

La Unidad de Microscopía y citometría del IBMCC facilita los siguientes servicios tanto a usuarios internos como a usuarios externos:

1. Microscopía de Súper-Resolución. Equipo Leica SP8.
2. Microscopía confocal: por medio de dos microscopios confocales Leica SP5 y Zeiss LSM510.
3. Imagen de célula viva y deconvolución. Sistema Delta-Vision.
4. Imagen de célula viva: microscopio de fluorescencia Nikon Eclipse TE-2000 para célula viva con cabina de control de temperatura y CO2.
5. Separación de poblaciones celulares y análisis multi-paramétrico de poblaciones celulares en una mínima cantidad de tiempo. BD FACAS AriaIII.
6. La unidad también se encarga del mantenimiento y cuidado de todos los microscopios del IBMCC (un microscopio de histología, un micromanipulador, un microinyector, 2 estaciones de trabajo para la obtención de imágenes y datos a partir de preparaciones histológicas de manera automática, 11 equipos de microscopia de epifluorescencia y 10 microscopios para los cultivos celulares).

Actividad de la Unidad:

• Recepción y adecuado procesamiento de muestras biológicas según procedimientos recogidos en el sistema de gestión de calidad implantado en el CIC (de acuerdo a la norma ISO9001/2008).
• Manejo de muestras de distinto origen (humano, ratón, líneas celulares, etc.) y su preparación para la adecuación a los equipos de microscopía y de separación citómica.
• Manejo y dirección de las sesiones de trabajo de los principales equipos con los que cuenta el servicio, así como el de los diferentes programas informáticos empleados para la obtención / procesamiento de las imágenes adquiridas.
• Ayuda a los usuarios con el uso de los diferentes softwares de captura y tratamiento de imagen, incluyendo SoftWorx®, MetaMorph ®, Openlab®, AxioVision®, LSM Image Browser® y DPManager ®.
• Revisión mensual de todos los microscopios. En esta revisión se incluye ajuste de fases, ajuste Köhler y limpieza de objetivos.
• Revisiones semanales de las salas de microscopía con reposición de material.
• Cambio y reparación de lámparas de mercurio y halógenas.
• Mantenimiento del Sistema de Calidad de la Unidad. Certificado ISO: ISO 9001:2008.
• Mantenimiento de la política de Riesgos Laborales según la norma OSHAS 18001:2007.

Equipos / estaciones más complejos, la unidad cuenta con:

• Equipo de microscopía óptica laser confocal, Leica SP5 equipado con siete líneas de excitación, seis canales de detección simultáneos (cinco detectores para reflexión y/o fluorescencia y otro para luz transmitida) y un sistema AOTF que permite la separación de las señales emitidas. Dicho sistema cubre una amplia gama de aplicaciones que incluyen FRAP, FRET, así como estudios de co-localización. Además de estar equipado con una cabina para Experimentos de Célula Viva, está equipado para llevar a cabo experimentos de larga duración (time lapse) en condiciones de Temperatura y CO 2 controladas sobre una platina motorizada XY.

• Equipo Leica SP8 (microscopía de súper-resolución) que posee sistemas totalmente integrados de agotamiento de emisión estimulada (STED). El sistema de  nanoscopía STED  ofrece una resolución de hasta 30 nanómetros y proporcionan un acceso rápido, intuitivo y puramente óptico por encima del límite de difracción de la luz. La resolución es sintonizable en los ejes  x, y y z. Los detectores híbridos Leica HyD junto con el láser de luz blanca como fuente de excitación pulsada permiten la detección de señales limitadas en un portal de tiempo tras el impulso de excitación. Mediante el alejamiento del portal de tiempo del impulso de excitación, se puede alcanzar una resolución por debajo de 50 nm. El equipo, además, está integrado con el software LAS X, un software de tratamiento de imágenes que permite la obtención y manejo de las mismas con la mejor resolución posible.

• Microscopio confocal Zeiss LSM510.

• Estación de microscopía Delta-Vision que permite así mismo time-lapse en célula viva.

• Equipo de Microscopía Nikon Eclipse TE200-E.

Así mismo, la unidad dispone de un microscopio de histología, un micromanipulador, un microinyector, 2 estaciones de trabajo para la obtención de imágenes y datos a partir de preparaciones histológicas de manera automática, 11 equipos de microscopia de epifluorescencia y 10 microscopios para los cultivos celulares.

• Un equipo BD FACS AriaIII, un citómetro separador que puede soportar seis láseres y cuatro puntos de haz separados espacialmente que es capaz de seleccionar potencialmente seis longitudes de onda láser (633 nm, 561 nm, 488 nm, 445 nm, 405 nm y 375 nm) y 20 posiciones de detector con capacidad para medir 18 parámetros simultáneamente. Todo ello, permite un análisis multi-paramétrico de poblaciones celulares en una mínima cantidad de tiempo, ofreciendo la posibilidad de poder separar hasta 4 poblaciones celulares simultáneamente con un mínimo impacto en su viabilidad.

• Accuri-C6, un equipo de citometría de flujo compacto y versátil con un manejo y configuración sencilla con aplicaciones en áreas diversas como el ciclo celular, apoptosis, proliferación, viabilidad, señalización, daño del ADN, ploidía, entre otros.

Coordinador Científico

Alberto Martín Pendas
Tel.: 923 294809
E-mail: amp@usal.es

Dirección y contacto

Ana Isabel García Vega, Angel Luis Prieto Martín, Sara Armenteros González
Centro de Investigación del Cáncer
(CSIC-Universidad de Salamanca)
Avda. Universidad de Coimbra s/n
Campus Universitario Miguel de Unamuno
E- 37007 Salamanca (ESPAÑA)
Tel.: 923 492 720 / Ext: 3016. Móvil: 663172549

E-mail: microscopia_cic@usal.es