CONVOCATORIA:   2014

ENTIDAD FINANCIADORA:   INSTITUTO DE SALUD CARLOS III

INVESTIGADOR PRINCIPAL:    MANUEL FUENTES GARCÍA

DOTACIÓN:  71.500,00 euros

REFERENCIA:   PI14/01538

TÍTULO:   DISEÑO Y DESARROLLO DE ESTRATEGIAS NANOPROTEÓMICAS PARA LA CARACTERIZACIÓN DE BIOMARCADORES EN LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO EN ENFERMEDAD LEPTOMENINGEA, EMPLEANDO LINFOMA NON-HODGKIN COMO MODELO

RESUMEN: 

El objetivo general del presente proyecto es el desarrollo de una estrategia metodológica multi-paramétrica, altamente multidisciplinar, de fácil traslación a la clínica, para la detección de proteínas asociadas a tumor en pacientes con linfoma nonHodgkin agresivos de célula B (LHN-B) presentes en líquido cefaloraquídeo (LCR). Este novedoso sistema consistirá mediante técnicas mínimamente invasivas, para la determinación de infiltración de tumores en SNC (enfermedad leptomeníngea), a través de la determinación de fragmentos de proteínas del tejido patológico presentes en SNC; así como el grado de infiltración de la sangre en LCR; por otro lado, ambos asociados con una alta sensibilidad-especificidad a la existencia y pronóstico de la enfermedad. Los objetivos concretos son: 1.-seleccion de biomarcadores asociados ( identificados mediante técnicas nanoproteomicas de alto rendimiento) a la infiltración de LCR por linfocitos B tumorales. 2.-Diseño y desarrollo de un kit ( basado en array de proteínas) para la determinación multiplex y simultanea de los biomarcadores para su detección por citometría de flujo. 3.-Validación de un novedoso array en formato esfera utilizando como modelo sangre periférica y LCR de LNH-B. Metodología: Se incluirán un total de 100 muestras de LCR ( linfoma non-Hodgkin y Hodgkin) sobre los cuales se realizará la caracterización citomorfológica convencional por citometría de flujo; junto con la caracterización nanoproteómica de alta sensibilidad y resolución (nanoHPLC-Q-Velos) y el análisis de proteínas procedentes de células B neoplásicas mediante arrays proteicos. Resultados: El análisis masivo del proteoma de líneas celulares LNH ha permitido establecer el mapa de posibles biomarcadores y su correlación con datos de transcriptómica; llegando a identificar un > 9500 proteínas. La correlación de mapa peptídico (LC-MS/MS) de LCRs +/- infiltración; ha permitido identificar un panel de180 proteínas, que se evaluaron en 200 muestras de LCRs; de las cuales se seleccionó un panel final de 15 proteínas para su validación. Finalmente, se integrna los datos obtenidos con su correlación con los hallazgos clínico-biológicos.

ESTE PROYECTO ESTÁ COFINANCIADO POR EL FONDO EUROPEO DE DESARROLLO REGIONAL (FEDER). “Una manera de hacer Europa”