Caracterización de la interacción entre las proteínas de los hemidesmosomas BPAG1e e integrina α6β4
Ponente: José Antonio Manso
Centro de Investigación del Cáncer (CIC-IBMCC), lab 17
Fecha:
Hora: 12:30
Salón de Actos del CIC
Caracterización de la interacción entre las proteínas de los hemidesmosomas BPAG1e e integrina α6β4Los hemidesmosomas (HDs) son complejos multiproteicos de adhesión que median el anclaje de células epiteliales a la membrana basal. Los HDs están regulados de forma dinámica, induciéndose su desensamblaje en la diferenciación de queratinocitos, la migración durante la cicatrización de heridas y en la invasión de ciertos carcinomas. Los HDs están compuestos por tres proteínas transmembrana, integrina α6β4, la tetraspanina CD151 y BP180, y por dos proteínas citoplasmáticas pertenecientes a la familia de las plakinas, plectina y BPAG1e. La integrina α6β4 se asocia a filamentos intermedios de queratina a través de la unión a plectina y BPAG1e. Se conocía que la interacción entre BPAG1e y la integrina α6β4 se establece entre una zona próxima al extremo amino de BPAG1e y el tercer y cuarto dominios FnIII (FnIII-3,4) de la región citoplasmática de β4; pero se desconocían en detalle los sitios de unión. En este trabajo hemos mapeado sistemáticamente las zonas de unión en BPAG1e y β4. Para ello hemos analizado la interacción in vitro empleando un ensayo basado en cambios de anisotropía de fluorescencia de muestras marcadas con fluoresceína u Oregon Green. Mediante el análisis de mutantes de deleción de BPAG1e, hemos identificado una región de ~30 residuos que es suficiente para la unión a β4. Por otra parte, empleando una extensa colección de mutantes puntuales de β4 hemos identificado una zona importante para la unión a BPAG1e en un surco formado entre los dominios FnIII-3 y FnIII-4 de la integrina. Los mutantes puntuales de β4 fueron caracterizados estructuralmente mediante dispersión de rayos x a bajo ángulo (SAXS) con el objeto de esclarecer efectos estructurales en la interacción con BPAG1e. Nuestros resultados tienen implicaciones en la organización y regulación de HDs.