CONVOCATORIA:   2013

ENTIDAD FINANCIADORA:   INSTITUTO DE SALUD CARLOS III

INVESTIGADOR PRINCIPAL:    JULIA ALMEIDA PARRA

DOTACIÓN:  65.500,00 euros

REFERENCIA:   PI13/01412

TÍTULO:   CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA Y FUNCIONAL DE LOS MACRÓFAGOS CIRCULANTES: NUEVA ESTRATEGIA DE DIAGNÓSTICO PRECOZ Y DE MONITORIZACIÓN DE ENFERMEDADES

RESUMEN: 

El objetivo general del presente proyecto se centra en el desarrollo y validación de una nueva herramienta diagnóstica para el rastreo en una pequeña muestra de sangre periférica de la existencia de enfermedad oculta en otro tejido, para la detección precoz de dicha enfermedad y su monitorización terapéutica. Objetivos concretos: 1) Definir las características fenotípicas y funcionales de las distintas subpoblaciones de monocitos circulantes, en especial de los macrófagos tisulares circulantes; 2) Desarrollar una herramienta informática que permita visualizar en una representación bidimensional los distintos estadios de maduración de dichas células; 3) Desarrollar estrategias metodológicas para evaluar el contenido de los fagolisosomas en los macrófagos tisulares circulantes, para la detección de fragmentos de proteínas derivadas de células plasmáticas mielomatosas o células B linfomatosas; y 4) Validación y utilidad del método desarrollado respecto a métodos convencionales para el diagnóstico en sangre periférica de mieloma múltiple y linfomas no Hodgkin B. Diseño: estudio prospectivo transversal. Instrumentación: Para ello, se propone el empleo de técnicas altamente sensibles de citometría de flujo multiparamétrica de 8 o más colores, con anticuerpos monoclonales dirigidos simultáneamente frente a la población celular de interés y las proteínas específicas de tejido intracelulares, que se analizarán con programas avanzados de análisis de datos de citometría de flujo mediante herramientas de estudio de la maduración (Infinicyt); además, se ha comenzado con la caracterización funcional de las diferentes poblaciones bajo estudio: capacidad de diferenciación "in vitro" bajo diferentes estímulos mediante cultivos celulares y citometría de flujo multiparamétrica, y capacidad de fagocitosis y actividad oxidativa. Resultados: la citometría de flujo multiparamétrica he permitido identificar, dentro de los monocitos circulantes (HLADR+/CD300e+), las tres subpoblaciones previamente descritas (monocitos clásicos, intermedios y no clásicos); estas subpoblaciones de monocitos presentan un fenotipo claramente distinto entre ellas, que probablemente refleja un perfil de "homing" y una capacidad fagocítica diferente. Para el diseño de la combinación de anticuerpos en 11 colores idónea para estudiar el fenotipo de los monocitos y su maduración ha resultado crucial la implementación de herramientas adecuadas del programa de análisis, que será mejorado en los próximos meses. Además, se han iniciado los estudios funcionales in vitro, que pretenden optimizar las condiciones óptimas de diferenciación de una línea celular de monocitos para inducir la fagocitoris de células tumorales apoptóticas. Conclusiones: los perfiles fenotípicos, estudiados en este primer año en profundidad, complementan la información disponible actualmente sobre las subpoblaciones de monocitos circulantes, y sobre todo permiten una subclasificación dentro de las poblaciones conocidas hasta ahora, lo cual apoya la idea de que los monocitos son una población celular funcionalmente heterogénea.

ESTE PROYECTO ESTÁ COFINANCIADO POR EL FONDO EUROPEO DE DESARROLLO REGIONAL (FEDER). “Una manera de hacer Europa”